Test razgradnje ureje
Sposobnost razgradnje ureje (CH₄N₂O) ispituje se u tekućoj podlozi Stuartov ureja bujon.
🔬 CH₄N₂O + H₂O → CO₂ + NH₃ + H₂O (djelovanje enzima ureaze)
Stuartov ureja bujon
Sterilizacija i priprema
🌟 Preporučena metoda sterilizacije:
- Ureju sterilizirati membranskom filtracijom kroz filter promjera pora od 0,2 μm
- Uliti u Erlenmayerovu tikvicu s autoklaviranom podlogom na 121°C/20 min
⚠️ Alternativna metoda:
Ako se sterilizacija ne obavlja membranskom filtracijom, dodati ureju i nacijepiti podlogu što je prije moguće.
💡 Važno: Ureja je termolabilna i može se razgraditi pri visokim temperaturama, zato se preporučuje membranska filtracija
Mehanizam reakcije
Ako bakterija posjeduje enzim ureazu, razgrađivat će ureju do ugljikova dioksida, amonijaka i vode.
🧬 Enzimska reakcija:
CH₄N₂O + H₂O →[ureaza]→ CO₂ + 2NH₃ + H₂O
CO₂ + NH₃ + H₂O → (NH₄)₂CO₃
Pozitivna reakcija (ureaza +)
- Nastaje amonijkarbonat
- Povisuje se pH vrijednost
- Fenolno crvenilo mijenja boju
- Podloga pocrvenjeti
Negativna reakcija (ureaza -)
- Nema enzima ureaze
- pH ostaje nepromijenjen
- Nema promjene boje
- Podloga ostaje žuta
🎯 Ključna uloga fenolnog crvenila:
Fenolno crvenilo služi kao pH indikator - mijenja boju od žute (kiseliji pH) do crvene (lužnatiji pH) kada se stvara amonijkarbonat i povisuje pH vrijednost podloge.