Poglavlje 19

Sulfit reducirajuće klostridije

Clostridium rod bakterija koje reduciraju sulfit do sumporovodika

🦠

Rod Clostridium

Široki rang klostridija sposoban je u anaerobnim uvjetima iz sulfita producirati H₂S i otud dolazi i naziv sulfit-reducirajuće klostridije za cijeli rod Clostridium. Bakterije roda Clostridium su Gram-pozitivni anaerobni, sporogeni štapići, koji kod sporulacije poprimaju oblik vretena zbog velikih endospora (lat. Closter, vreteno).

Općenito su pokretni s peritrihnir bičevima, bez kapsule. Obligatni su anaerobi. Bakterije roda Clostridium široko su rasprostranjene u prirodi. Mnoge vrste stvaraju egzotoksine i patogene su za čovjeka i životinje zbog primarne izazvane infekcije ili potencijalne apsorpcije egzotoksina.

🔬 Karakteristike: Gram⁺, anaerobni, sporogeni štapići, oblik vretena

☠️

Clostridium perfringens

Clostridium perfringens ima kapsulu, nema bičeva, nepokretan je. Stvara subterminalne spore bez egzospora. Uzročnici su teških bolesti (plinska gangrena, sekundarne infekcije rana, enteritis, sepsa) a nastava probavni trakt životinja i ljudi te su pouzdan pokazatelj fekalnih zagađenja okoliša.

Preko fekalija dolaze u vodu i tlo. U organizam se unose najčešće ozlijeđenim tkivom u kojem se stvaraju anaerobni uvjeti. Posjeduju moćne egzotoksine. C. perfringens selektivno se uzgaja na tripton-sulfit neomicin agaru na 46°C/18 h. Temperatura uzgoja od 46°C selektivna je temperatura koja onemogućuje rast većine druge mikroflore saprofitskih bakterija prisutnih u uzorku te će porasti samo vrste C. perfringens.

⚠️ Patogen: plinska gangrena, enteritis, sepsa - pokazatelj fekalnog zagađenja

🧫

Tripton-sulfit-neomicin agar

Za selektivni uzgoj C. perfringens koristi se tripton-sulfit neomicin agar na 46°C/18 h.

Pepton iz kazeina 15,0 g
Ekstrakt kvasca 10,0 g
Na₂SO₃ 1,0 g
C₆H₁₁FeNO₇ 0,5 g
Polymyxin B sulfat 0,02 g
Neomycin sulfat 0,05 g
Agar 13,5 g
Destilirana voda 1000 mL
pH = 7,2 ± 0,2
🧪

SPS agar (Perfringens selektivni agar po Angelottiju)

Za uzgoj širokog ranga sulfit-reducirajućih klostridija koristi se temperatura inkubacije 35°C/48 h i SPS agar (Perfringens selektivni agar po Angelottiju).

Kazein 15,0 g
Ekstrakt kvasca 10,0 g
Na₂SO₃ 0,5 g
Fe-citrat 0,5 g
Polimiksin B sulfat 0,01 g
Na-sulfadiazin 0,12 g
Agar 13,5 g
Destilirana voda 1000 mL
pH = 7,0 ± 0,2

Crne kolonije klostridija

Vrste roda Clostridium sposobne su u anaerobnim uvjetima iz sulfita stvarati H₂S. Stvoreni H₂S precipitirat će se sa željezom u podlozi i tvoriti crni talog željeznog sulfida (FeS). Stoga će ovalne kolonije roda Clostridium u epruvetama s dubokim SPS agarom biti u dubini podloge obojene crno. Dodatak neomicina i polimiksina inhibirat će razvoj ostalih sulfit reducirajućih bakterija.

Crne kolonije sulfit-reducirajućih klostridija izolirane u dubokom SPS agaru
Slika 81 Crne kolonije sulfit-reducirajućih klostridija izolirane u dubokom SPS agaru
Dodatni primjer crno obojenih kolonija proizvođača H₂S na PCA (Slika 81a)
Slika 81a Postupak određivanja bakterija sumporovodika iz uzorka.

🧪 Pozitivna reakcija: Crne ovalne kolonije zbog taloga FeS

Započni učenje?

Započni svoj put u bakteriologiji danas. Svako poglavlje je samostalna cjelina s teorijom, praktičnim vježbama i provjerom znanja.