Pregled vježbi
U ovoj vježbi ćete naučiti o streptomicetima i njihovim antibiotskim svojstvima. Vježba obuhvaća:
Sadržaj vježbe:
- 1 Izolacija streptomiceta iz tla na Czapekovom agaru
- 2 Izolacija streptomiceta u čistoj kulturi
- 3 Mikroskopiranje streptomiceta
- 4 Izrada antibiograma s antibioticima stvorenim iz streptomiceta
- 5 Dokazivanje da streptomicete razgrađuju celulozu
1. Izolacija streptomiceta iz tla na Czapekovom agaru
Pripremiti uzorak tla tako da se 1 g svježeg uzorka homogenizira u epruveti s 9 mL sterilne destilirane vode s dodatkom 0,3% NaCl. Napraviti seriju decimalnih razrjeđenja uzorka.
Po 0,1 mL iz odgovarajuće serije decimalnog razrjeđenja nacijepiti metodom širenja razmaza na Petrijeve ploče s Czapekovim agarom. Nakon inkubacije (26°C/7 dana) brojiti suhe, tvrde, bijele ili različito obojene, kožaste, male, na rubu čupave kolonije (slika 89) i izračunati broj streptomiceta po 1 g tla.
2. Izolacija streptomiceta u čistoj kulturi
Pikirati bakteriološkom ušicom zračni micelij pojedinačne kolonije streptomiceta. Na jednoj Petrijevoj ploči s Czapekovim agarom nacijepiti po četiri kolonije streptomiceta, svaku potezom lijevo-desno na jednoj četvrtini agara (slika 90).
Ploče nanovo inkubirati na 26°C/7 dana dok se ne razviju streptomicete u čistoj kulturi.
3. Mikroskopiranje streptomiceta
Porasle čiste kulture streptomiceta mikroskopirati na agaru pod malim i srednjim povećanjem.
Kolonije streptomiceta na rubu su čupave, zračne pseudohife (slika 91) nitaste su i mogu različito završavati (ravno, kukasto ili spiralno), a konidiospore se vide u obliku sitnih tamnih kuglica.
4. Izrada antibiograma s antibioticima stvorenim iz streptomiceta
Za izradu antibiograma s antibioticima stvorenim iz streptomiceta potrebno je izrezati diskove sa strepromicetama na ploči s izoliranim čistim kulturama s malom prethodno flambiranom epruvetom. Na Petrijeve ploče s hranjivim agarom bakteriološkom ušicom gusto namazati čiste kulture: Escherichia coli, Staphylococcus aureus ili dr.
Na svaku ploču nacijepljenu jednom čistom kulturom bakterija ravnomjerno rasporediti sterilnom iglom diskove sa streptomicetama tako da je zračni micelij okrenut prema gore. Inkubirati ploče 24 h/35°C. Nakon inkubacije očitati zone inhibicije rasta (slika 94).
5. Streptomicete razgrađuju celulozu
Uzeti prethodno steriliziranu trakicu filtar papira i bakteriološkom ušicom namazati čistu kulturu streptomiceta na dijelu trakice koji će stajati u epruveti iznad Hutschinson bujona. Trakicu umočiti u bujon i inkubirati na 26°C/14 dana.
Nakon inkubacije kao celulolitičke sojeve streptomiceta uzeti sve one koji su porasli na površini filtar papira.