Metode bojenja bakterija
Oblik bakterijskih stanica može se odrediti mikroskopiranjem samo kad ih obojimo otopinama pojedinih bakterioloških boja. U tu svrhu potrebno je pripraviti tzv. bakteriološki preparat za mikroskopiranje.
Tri su osnovna uvjeta za izradu dobrog bakteriološkog preparata:
- suha, odmašćena površina predmetnog stakalca (ispiranje predmetnice etanolom i provlačenje kroz plamen)
- što tanji razmaz bakterijskog materijala po stakalcu
- sušenje preparata na sobnoj temperaturi.
Za sva bojenja bakterija čiste kulture bakterija moraju biti u log fazi rasta.
Ako se preparat za bojanje bakterija pripravlja iz bakterijske suspenzije, uzorak se uzima bakteriološkom ušicom i tanko razvuče po predmetnom stakalcu.
Ako se mikroskopiraju bakterijske kolonije s agarne podloge, na predmetnicu se stavi kap destilirane vode s dodatkom 0,3 % NaCl, bakteriološkom se ušicom uzme malo materijala kolonije, prenese se u kap i razvuče u što tanjem sloju na predmetnom stakalcu.
Pripremljeni mokri preparati osuše se na sobnoj temperaturi. Da se prilikom bojenja bakterije ne bi mehanički uklonile s predmetnog stakalca (oprale mlazom boje ili vode), osušeni razmaz fiksira se provlačenjem kroz plamen.
Fiksiranje preparata plamenom obavlja se tako da se predmetnica tri puta provuče kroz plamen Bunsenova plamenika, tako da je preparat s gornje strane, a svaki prolazak kroz plamen predmetnice traje oko 1 sekundu.
Tako fiksiran preparat zatim se boji na stoliću ili u kadici za bojenje preparata (slika 20).
