Vježba 3.4 - Bojenje bakterija po Gramu

Na osušeni preparat fiksiran na plamenu nanijeti kristal violet. Nakon 3 min odliti (ne ispirati vodom). Preliti Lugolovom otopinom (zasićena otopina joda u kalijevu jodidu), odmah odliti i ponovno preliti te ostaviti stajati 1 min. Lugol služi kao sredstvo da s kristal violetom stvara netopljivi kompleks. Taj će se kompleks vezati s komponentom magnezij-ribonukleinska kiselina u staničnoj stijenci. Nakon 1 min odliti sadržaj. Predmetno stakalce s preparatom uroniti u kadicu s 96%-tnim etanolom, pincetom izvaditi i kontrolirati prestanak izlaženja ljubičaste boje. Može se i preparat na stoliću preliti etanolom nekoliko puta do prestanka izlaženja boje. Djelovanje alkohola prekinuti ispiranjem tekućom vodom. Preparat osušiti i preliti razrijeđenim karbol fuksinom ili safraninom. Nakon 30 sek isprati tekućom vodom. Obojeni se preparat osuši između filter-papira ili na zraku. Na preparat se doda kap imerzionog ulja i mikroskopira pod imerzionim objektivom. Metodom bojenja po Gramu Gram-pozitivne bakterije oboje se plavo, a Gram-negativne bakterije crveno (slika 21).