Uvod u test
Kliglerov dvostruki šećer služi za određivanje fermentacije glukoze i laktoze, stvaranje plinova sumporovodika (H₂S) i ugljikova dioksida (CO₂).
Sastav Kliglerova dvostrukog šećera
Princip rada
Dodavanje četiri vrste izvora proteina (ekstrakta govedine, ekstrakta kvasca, peptona i proteoza-peptona) omogućuje rast širokog ranga bakterija. Koncentracija laktoze u sastavu Kliglerova dvostrukog šećera je deset puta viša nego glukoze. Fenolno crvenilo je pH-indikator koje je crvene boje kod početne pH-vrijednosti same podloge (7,4). Čista kultura bakterije nacjepljuje se bakteriološkom ušicom ubodom do dna (u dubinu) i potom potezom lijevo-desno po kosini agara.
Razgradnjom proteina sadržanih u sastavu podloge nastaju amini te podloga postaje lužnata, a u lužnatom pH fenol crveno crvene je boje. Fermentativnom razgradnjom šećera nastaju kiseline te se pH podloge snižava na 6,8 ili niže, gdje fenolno crvenilo mijenja boju u žutu.
Ako bakterija razgrađuje samo glukozu, stvorit će se manje količine kiselina jer glukoze u podlozi ima 10 puta manje nego laktoze. Paralelno s korištenjem glukoze bakterija će se koristiti i proteinima, čijom razgradnjom nastaju lužine. Stoga će nastati neutralizacija stvorenih kiselina lužinama, ali samo na kosom aerobnom dijelu. Razgradnja proteina u dubokom stupcu agara manje je intenzivna od fermentacije glukoze te se zbog sniženja pH-vrijednosti boja stupca mijenja u žutu, tako da će kosina dubokog agara biti crvene boje, a duboki stupac žute.
Ako bakterija razgrađuje glukozu i laktozu - koje u podlozi ima 10 puta više no glukoze - stvorena količina kiselina nastala fermentacijom šećera bit će dominantna prema količini stvorenih lužina, tako da će i kosina i dubina agara biti žuto obojene. U nekih bakterijskih vrsta (E. coli) fermentacija šećera vrlo je intenzivna, pri čemu se stvara vrlo velika količina plina CO2 u kratkom vremenu. Zbog toga cijeli stupac agara može biti podignut od dna epruvete.
Kod bakterijskih vrsta koje produciraju iz aminokiselina koje sadrže sumpor plin H2S, stvoreni bezbojni plin H2S reagirat će sa željezom u podlozi tvoreći pritom netopivi crni talog željeznog sulfida (FeS).
Jasno vidljive reakcije na podlozi Kliglerov dvostruki šećer mogu biti sljedeće:
Kosina crveno / dubina crveno = nema fermentacije ni glukoze ni laktoze, npr. Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter calcoaceticus
Kosina crveno / dubina žuto = fermentirana je glukoza, laktoza nije fermentirana, npr. Shigella sp., Proteus morgani
Kosina crveno / dubina žuto i crno = fermentirana je glukoza, laktoza nije fermentirana, proizveden plin H2S, npr. Salmonella sp., Citrobacter sp.
Kosina žuto / dubina žuto = fermentirana je glukoza i laktoza, npr. E. coli, Citrobacter sp., Enterobacter sp.
