Uvod
Bakterije koje želimo identificirati pomoću ovog sustava moraju biti izolirane na podlogama prikladnim za uzgoj enterobakterija (npr. Mac-Conkey agar).
Postupak pripreme
• Pripremiti inkubacijsku komoricu (kadica i poklopac) i uliti otprilike 5 mL destilirane vode u saćaste jažice kadice kako bi se stvorila vlažna atmosfera
• Upisati broj uzorka na produženi dio folije poklopca
• Izvaditi strip iz pakiranja
• Uložiti strip u inkubacijsku komoricu
• Otvoriti ampulu NaCl 0,85% i pomoću mikrobiološke ušice prenijeti sa ploče jednu dobro izoliranu koloniju (kultura ne smije biti starija od 18-24 sata)
• Pažljivo razmutiti koloniju kako bi se postigla homogena bakterijska suspenzija (suspenziju upotrijebiti odmah po pripremi)
• Pomoću pipete, napuniti bakterijskom suspenzijom cjevčice i kupole testova [CIT], [VP], [GEL]. Napuniti samo cjevčice (ne i kupole) ostalih testova
• U kupole testova ADH, LDC, ODC H2S i URE ukapati mineralno ulje kako bi se stvorila anaerobna atmosfera
• Zatvoriti inkubacionu komoricu
• Inkubirati na 36 ± 2°C 18-24 sata
Očitavanje rezultata
Nakon inkubacije (slika 40) zabilježiti rezultate svih spontanih reakcija, a potom očitati testove koji zahtijevaju dodatak reagensa:
TDA test: dodati 1 kap TDA reagensa. Crvenosmeđa boja označava pozitivnu reakciju.
VP test: dodati po jednu kap reagensa VP 1 i VP 2. Pričekati 10 minuta. Ružičasta ili crvena boja označava pozitivnu reakciju.
IND test: dodati 1 kap reagensa JAMES. Ružičasta boja koja se razvija u cijeloj kupoli označava pozitivnu reakciju. Test produkcije indola mora se izvesti posljednji jer tijekom te reakcije nastaje produkcija plina koji može utjecati na interpretaciju ostalih testova.
Rezultate zabilježiti na temelju tablice očitavanja (tablica 2).
Tablica očitavanja API® 20 E
Tablica 2. Tablica očitavanja sustava API 20E
| TEST | AKTIVNA SUPSTANCIJA | REAKCIJA/ENZIM | NEGATIVNO | POZITIVNO |
|---|---|---|---|---|
| ONPG | D-galaktopiranizid | B-galaktozidaza | bezbojno | žuto |
| ADH | L-arginin | arginin dihidrolaza | žuto | crveno/narančasto |
| LDC | L-lizin | lizin dekarboksilaza | žuto | crveno/narančasto |
| ODC | L-ornitin | ornitin dekarboksilaza | žuto | crveno/narančasto |
| [CIT] | trinatrijev sulfat | iskorištavanje citrata | svijetlo zeleno/žuto | plavozeleno/plavo |
| H2S | natrijev tiosulfat | produkcija H2S | bezbojno/sivkasto | crni talog/tanka linija |
| URE | ureja | ureaza | žuto | crveno/narančasto |
| TDA | L-triptofan | triptofan deaminaza | žuto | crvenkasto smeđe |
| IND | L-triptofan | produkcija indola | bezbojno svijetlo zeleno/žuto | ružičasto |
| [VP] | natrijev piruvat | produkcija acetoina (Voges Proskauer) | bezbojno | ružičasto/crveno |
| [GEL] | želatina | želatinoza | nema difuzije | difuzija crnog pigmenta |
| GLU | D-glukoza | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto/sivkastožuto |
| MAN | D-manitol | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| INO | inozitol | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| SOR | D-sorbitol | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| RHA | L-ramnoza | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| SAC | D-sukroza | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| MEL | D-melibioza | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| AMY | amigdalin | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| ARA | L-arabinoza | fermentacija/oksidacija | plavo/plavozeleno | žuto |
| OX | - | citokrom oksidaza (vidi uputu za upotrebu oksidaza testa) | - | - |
Numerički profil i identifikacija
Identifikacija bakterija dobiva se na osnovi numeričkog profila. Na listiću za unos rezultata testovi su podijeljeni u skupine od po tri testa s vrijednostima 1, 2 ili 4 (slika 41). Zbrajanjem vrijednosti pozitivnih rezultata u svakoj skupini dobiva se sedmeroznamenkasti numerički profil za 20 testova API 20 E stripa.
Reakcija oksidaze predstavlja 21. test i nosi vrijednost 4 ako je pozitivna. Identifikacija se izvodi pomoću programa za identifikaciju (preko tipkovnice unijeti sedmeroznamenkasti numerički profil).
