CFU - Colony Forming Units
Broj aerobnih saprofitskih, organotrofnih ili heterotrofnih bakterija indirektni je indikator prisutnosti lako razgradive organske tvari u vodi, a upozorava na svježa organska zagađenja.
Kako bi se izbjegle greške u izražavanju, jer nikada nije sigurna pretpostavka da je iz svake pojedinačne žive (vijabilne) stanice porasla jedna kolonija mikroorganizama, broj poraslih kolonija izražava se kao broj jedinica koje stvaraju kolonije (engl. Colony Forming Units, CFU).
Brojenjem poraslih kolonija zaključujemo koliko je bilo živih vijabilnih stanica u vodotoku ili suspenziji tla. Da bismo dobili propisan broj kolonija na Petrijevim zdjelicama između 10 i 300, potrebno je često prvo pripremiti seriju decimalnih razrjeđenja uzorka. Poznati volumen uzorka iz odgovarajuće serije decimalnog razrjeđenja nacijepiti na hranjivu podlogu u Petrijevim zdjelicama (slika 43). Za uzgoj saprofitskih bakterija koristi se neselektivna podloga hranjivi agar i inkubacija na 22°C / 72 h.
Metode nacjepljivanja uzoraka
Uzorak se na ploče može nacjepljivati na nekoliko načina: metodom širenja razmaza (engl. Spread Plate Method), metodom izlijevanja rastopljene agarne podloge (engl. Pour Plate Method) i metodom membranske filtracije.
Metoda širenja razmaza provodi se tako da se na skrućenu hranjivu podlogu u Petrijevoj zdjelici odpipetira određeni volumen uzorka i raširi po podlozi prije flambiranim drygalskim štapićem (stakleni štapić svinut pod 90°).
Metoda izlijevanja podloge provodi se tako da se u Petrijevu zdjelicu odpipetira određeni volumen uzorka, na koji se izlijeva rastopljena podloga s agarom temperature 45°C. Sadržaj zdjelice lagano se promiješa i ostavi da se skrutne.
Za metodu membranske filtracije pod vakuumom uzorak vode potrebno je profiltrirati kroz membranski filtar promjera pora 0,2-0,45 μm. Filtar se sterilno prenese na skrućenu hranjivu podlogu u Petrijevoj zdjelici. Bakterije zadržane na membranskom filtru sposobne su difuzijom uzimati hranjiva iz podloge i porast će u obliku kolonija na filtru.
Razlike u rastu kolonija
U metode širenja razmaza kolonije porastu na površini podloge (slika 44), a u metode izlijevanja podloge većina kolonija poraste u obliku sitnih zareza unutar podloge.
Brojenje kolonija
Brojenje poraslih bakterijskih kolonija obavlja se na aparatu koji zovemo brojač kolonija (slika 45).
