Poglavlje 7

Vježbe 7: Određivanje ukupnog broja bakterija u Petroff-Hauserovoj komorici

Praktične vježbe iz direktnog određivanja broja bakterija

🔢

Određivanje ukupnog broja bakterija u Petroff-Hauserovoj komorici

Uzorak površinske vode u Winklerovoj boci homogenizirati energičnim mućkanjem. Na mrežicu Petroff-Hauserove komorice, koja je u središnjem dijelu, staviti pokrovno stakalce tako da čvrsto prianja uz komoricu. Pipetom nanijeti kap uzorka uz rub na sredini pokrovnog stakalca, a filtar papirom pokupiti eventualni višak uzorka. Uzorak će kapilarno ispuniti mrežicu Petroff-Hauserove komorice.

Na pokrovnicu staviti kap imerzijskog ulja (anisol ili cedrovo ulje) i mikroskopirati pod imerzijskim objektivom (povećanje 1000 x). Izbrojati stanice unutar 25 kvadratića središnje mreže (uključujući i one koje se nalaze na crti) i izračunati ukupan broj stanica u 1 mL uzorka, uzimajući u obzir volumen komorice.

🧮

Izračun broja bakterija

Petroff-Hauserova komorica podijeljena je u kvadratiće, a stanice se broje u 25 središnjih kvadratića omeđenih dvostrukim crtama. Volumen svakog malog kvadratića u komorici je 5 × 10⁴ μm³ (slika 47). Kako 1 mL iznosi 1 × 10¹² μm³, frakcija 1 mL volumena u svakom kvadratiću komorice je 1 × 10¹² μm³ podijeljena u 5 × 10⁴ μm³, što iznosi 5 × 10⁻⁸ mL po kvadratiću.

Drugim riječima, ima 2 × 10⁷ kvadratića po jednom mL. Stoga, za izračun broja stanica po 1 mL iz broja ustanovljenog u Petroff-Hauserovoj komorici, potrebno je srednju vrijednost broja u 25 kvadratića pomnožiti sa 2 × 10⁷.

Primjer izračuna

Ako je npr. u Petroff-Hauserovoj komorici volumena 0,02 mm³, što pokriva 25 kvadratića središnje mreže, izbrojeno prosječno 150 stanica, potrebno je dobiveni broj pomnožiti sa 2 × 10⁷, što će iznositi 3,0 × 10⁹ stanica po 1 mL.

Započni učenje?

Započni svoj put u bakteriologiji danas. Svako poglavlje je samostalna cjelina s teorijom, praktičnim vježbama i provjerom znanja.