Koliformne bakterije
Koliformne bakterije fakultativno su anaerobne, Gram-negativne, štapićaste, nesporogene bakterije koje fermentiraju laktozu stvarajući kiselinu i plin. Ukupne koliformne bakterije razgrađuju laktozu na 35±0,5°C/48 h, a fekalne koliformne bakterije na 44,5±0,2°C/24 h.
Koliformne bakterije primarno su nepatogene bakterije, koje normalno obitavaju u donjem zdravom intestinalnom traktu (debelom crijevu) čovjeka i toplokrvnih životinja. Štite crijevo od infekcija te osiguravaju sintezu skupine vitamina B. Milijarde koliformnih bakterija izlučuju se fekalijama te dospijevaju komunalnim otpadnim vodama u prirodne vode, a relativno brzo i lako dokazuju se u laboratoriju.
Značaj kao indikatora
Ako fekalije potječu iz oboljelog čovjeka ili životinje, u njima će biti prisutne i patogene bakterije, koje uzrokuju crijevne infekcije i teška oboljenja poznata kao hidričke infekcije (prenose se vodom). Od patogenih bakterija mogu biti prisutni uzročnici:
- kolere (Vibrio cholerae)
- tifusa (Salmonella typhi)
- salmoneloza (Salmonella sp.)
- dizenterije (Shigella dysenteriae)
- gastroenteritisa (Campylobacter jejuni) i dr.
Mnoge patogene bakterije prisutne su u okolišu u niskim brojčanim vrijednostima te je njihova detekcija teška. Stoga se u sanitarnoj analizi vode od 1912. g. koriste kao indikatori fekalnog zagađenja i moguće prisutnosti patogenih crijevnih bakterija upravo koliformne bakterije. Uključuju vrstu Escherichia coli i srodne vrste koje normalno obitavaju u debelom crijevu kao što su vrste rodova Citrobacter, Enterobacter i Klebsiella.
Endo agar
Koliformne se bakterije lako dokazuju uzgojem na krutim ili tekućim selektivnim podlogama. Endo agar je selektivna i diferencijalna podloga za uzgoj koliformnih bakterija. Na-sulfit i bazični (dijamant) fuksin u podlozi inhibiraju rast Gram-pozitivnih bakterija. Bakterije koje intenzivno fermentiraju laktozu kao međuprodukt stvaraju acetaldehid koji se fiksira pomoću Na-sulfita, a reakcija s bazičnim fuksinom daje metalni sjaj zbog reduciranog fuksina. Stoga na Endo agaru kolonije Escherichia coli budu zlatnog metalnog sjaja, a kolonije drugih koliformnih bakterija različite nijanse roza boje (slika 48).
EC X-GLUC agar
EC X-GLUC agar visoko je selektivna i diferencijalna kromogena podloga za uzgoj koliformnih bakterija. Rast Gram-pozitivnih bakterija inhibiran je žučnim solima u sastavu podloge. Podloga sadrži X-GLUC (5-bromo-4-kloro-3-indolil β-D-glukuronid) za dokazivanje prisutnosti enzima β-glukuronidaze. Od koliformnih bakterija samo Escherichia coli (i neki sojevi Salmonella i Shigella) posjeduju β-glukuronidazu, te mogu razgraditi X-GLUC do plavo obojenih produkata. Stoga porasle kolonije E. coli budu plave boje, a kolonije drugih koliformnih bakterija (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Proteus) bijele do žućkaste boje (slika 49).
Zbog prisutnosti triptofana u podlozi direktno se mogu dokazati indol-pozitivne kolonije razvijene na ploči. Dodatkom nekoliko kapi Kovazcseva reagensa za dokazivanje indola na bakterijske kolonije, oko indol-pozitivnih kolonija E. coli stvori se tamnocrveni prsten, što ih razlikuje od eventualno poraslih plavih kolonija iz roda Salmonella i Shigella.
Navedene metode za dokazivanje koliformnih bakterija izvodive su i pomoću tehnike membranske filtracije.
EC-bujon
EC-bujon visoko je selektivna tekuća podloga za izolaciju koliforma iz vode, otpadne vode, mlijeka i druge hrane. Sadrži laktozu, a rast Gram-pozitivnih bakterija inhibiran je žučnim solima.