Potvrdni test
Potvrdni test sanitarne analize vode provodi se radi dokazivanja sigurne prisutnosti koliformnih bakterija u prethodnom pozitivnom testu, kako bi se isključile tzv. lažne kolimetrijske reakcije. Često se za izolaciju pojedinačnih kolonija koliforma rabi MacConkeyev agar, Endo agar ili EC X-GLUC agar.
MacConkeyev agar selektivna je podloga koja omogućuje rast pripadnika porodice Enterobacteriaceae (crijevni Gram-negativni bacili), a rast Gram-pozitivnih bakterija inhibiran je žučnim solima i kristal violetom. Izvor je ugljikohidrata laktoza, a fermentacija laktoze uzrokuje zakiseljavanje medija s popratnom precipitacijom žučnih soli i apsorpcijom neutralnog crvenila. Kolonije Escherichia coli rastu kao kolonije crvene boje s crvenom zonom precipitacije, a kolonije drugih koliformnih bakterija roze su boje (slika 54). Eventualno porasle kolonije bakterija roda Salmonella i Shigella su prozirne.
Sastav i agari
Endo agar selektivna je podloga za uzgoj koliforma, jer Na-sulfit i bazični (dijamant) fuksin inhibiraju rast Gram-pozitivnih bakterija. Bakterije koje intenzivno fermentiraju laktozu kao međuprodukt stvaraju acetaldehid koji se fiksira pomoću Na-sulfita, a reakcija s bazičnim fuksinom daje metalni sjaj zbog reduciranog fuksina. Kolonije fekalne koliformne bakterije vrste E. coli na Endo agaru crvene su karakterističnog metalnozlatnog sjaja (tipične kolonije slika 55), a kolonije ostalih koliforma su roza do crveno obojene (atipične kolonije).
Mnogo jasnije razlikovanje E. coli od ostalih koliformnih bakterija dobiva se na visoko selektivnoj kromogenoj podlozi EC X-GLUC agar. Ova podloga sadrži komponentu X-GLUC umjesto laktoze, čijom intenzivnom razgradnjom, što čini E. coli, nastaju plavo obojeni produkti. Stoga kolonije E. coli budu plave boje, a kolonije drugih koliformnih bakterija (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella) bijele do žućkaste (slika 56). Rast Gram-pozitivnih bakterija inhibiran je žučnim solima.
🧫 Sastav MacConkeyeva agara
