Uvod u test
Za izvođenje ovog testa koristi se Metilno crvenilo / Voges-Proskauerov bujon.
Sastav Metilno crvenilo/Voges-Proskauerov bujona
Metilno crvenilo test
Bakterije mogu fermentirati glukozu mješovito-kiselim ili butilenglikolnim putem. U mješovito-kiselom putu fermentacije stvaraju se jake kiseline (jantarna, mliječna, mravlja, octena kiselina) koje su dovoljne da nadvladaju puferski sustav podloge pri produženoj inkubaciji (35°C/48-72 h) i održavaju pH-vrijednost ispod 4,4. Metilno crvenilo je kod pH 6,9 žute boje, a kod 4,4 i niže crvene boje. Kad se u epruvetu nakon razdoblja inkubacije ukapa metilno crvenilo, crvena boja u epruveti upozorit će da je test metilno crvenilo pozitivan (vrste roda Citrobacter, Escherichia, Salmonella, Shigella), a žuta boja (vrste roda Enterobacter, Klebsiella) da je test negativan (slika 35). Pojava narančaste boje upozorava da su u epruveti stvorene slabije kiseline, što je dokaz negativnog testa.
Voges-Proskauerov test
Prije provedbe testa metilno crvenilo otpipetira se polovica medija u čistu sterilnu epruvetu te se u bujon doda 0,5 mL Barritov reagensa. Epruveta se protrese i ostavi stajati 15 min. U butilenglikolnom putu fermentacije glukoze neke bakterije stvaraju acetilmetilkarbinol. Acetoin u epruveti bit će preveden u diacetil u prisutnosti atmosferskog kisika i KOH, a katalitičkim djelovanjem α-naftola i kreatina diacetil će biti preveden u crveno obojen kompleks. Ako se sadržaj epruvete oboji crveno nakon 15 min od dodatka reagensa, Voges-Proskauerov test je pozitivan. Bakterije rodova Enterobacter i Klebsiella pokazuju pozitivni Voges-Proskauerov test.
🧪 Barritov reagens ▼
- α-naftol: 5,0 g
- Etanol (96%): 95,0 mL
- KOH: 40,0 g
- Kreatin: 0,3 g
- Destilirana voda: 100,0 mL